試料中のＬ－システインに、Ｌ－システインに反応してアンモニア、ピルビン酸及び硫化水素を生成する反応を触媒し、Ｄ－システイン、ホモシステインとは実質的に反応しないＬ－システイン分解酵素を、ピリドキサル－５’－リン酸の存在下において作用させ、生成されたいずれかの反応生成物を定量することを特徴とするＬ－システインの測定方法を開発し、本発明により、試料中のＬ－システインを安価で、正確かつ簡便に測定することが可能となること、また、Ｌ－システイン測定において多数の検体処理が可能となることを見出した。